Diagnostikoa II

2. Diagnostiko molekularra:

Gaixotasuna sortzen duen genean oinarritzen da

-CFTR genea

DNA MAILAKO AZTERKETAK DIRA

Erabilerak:

-Pertsona indibidualen diagnostikoan

-Datu epidemiologikoak biltzeko populazioan

-Familiartekoak FK izateko susmoa dagoenean

-Haurdun dauden emakumeetan (diagnostiko prenatala)

-FK duen haurra izateko arriskua duten pertsonetan inplantazio aurreko diagnostikoa egiteko.

PCR MULTIPLEX TEKNIKA

Badaude mutazio panel espezifikoak  FK diagnostikatzeko prestatuak. Hauek 25 mutazio arruntenak biltzen dituzte, taulan agertzen direnak.

 

3120+1G>A	A455E	G85E	R334W	1717-1G>A
3659delC	ΔF508	R347P	1898+1G>A	3849+10kbC>T
ΔI507	N1303K	R553X	2184delA	621+1G>T
G542X	R1162X	R560T	2789+5G>A	711+1G>T
G551D	R117H	W1282X	1078delT	I148T

DELEZIOEN ANALISIA

MLPA (multiplex ligation-dependent probe amplification), sekuentziazioak detekta ezin dituen mutazioak aurki ditzazke.

Adibidez mutazioa eskualde erregulatzaile batean dagoenean.

- PCR multiplex probaren forma berezia da.

- Bi oligonukleotido erabiltzen dira

- Aztertzen ari garen sekuentzia bakoitzerako oligonukleotidoak luzera desberdinekoak izango dira (marrazkin zati berdea), ondoren PCR bidez desberdindu ahal izateko.

- Aurkitu nahi dugun sekuentzia baldin badago bi oligonukleotidoak jarraian kokatzen dira. Gu aurkitzen ari garen sekuentzia ez badago ez dira jarraian jartzen eta ez dira ondoren amplifikatuko.

- Bi oligonukleotidoak batzen dira eta ondoren amplifikatu PCR bidez.

- Lortutako produktuak elektroforesis analizatzen dira.

- Emaitzak beste emaitza batzuekin konparatzen dira dira

DNA-REN SEKUENTZIAZIOA

Teknika hau mutazioa oso arraroa denean erabiltzen da eta horrela, exoi, introi guztiak, eskualde promotorea sekuentziatzean CFTRaren mutazioen %98 detektatzen da .